定量蛋白質組學新技術新方法研究取得新進展
近日，中科院大連化學物理研究所生物分離分析新材料與新技術研究組（1809組）鄒漢法、葉明亮研究員等人在定量蛋白質組學新技術新方法研究方面取得新進展。相關研究成果發(fā)表在最新一期的Angew. Chem. Int. Ed. 上(2013年52卷，9205-9209頁)（http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.201303429/abstract）。
該項研究工作利用胰蛋白酶的連接活性，發(fā)展了特異性N端穩(wěn)定同位素標記肽段的新方法，并成功應用于定量蛋白質組學分析。首先，與傳統(tǒng)蛋白質組方法一樣，將蛋白質樣品在水相緩沖溶液中經過胰蛋白酶酶解產生肽段。然后，利用新型的酶促化學反應進行標記。肽段樣品經過凍干后，轉移到含微量水的乙醇體系中，又在胰蛋白酶的催化下將穩(wěn)定同位素編碼的精氨酸連接到這些肽段的N末端，從而實現(xiàn)對肽段的同位素標記和蛋白的相對定量。該酶促標記反應條件溫和，具有高度標記區(qū)域的專一性，大大減少了常規(guī)化學標記方法中肽段降解和副反應的發(fā)生。胰蛋白酶作為水解酶通常用來酶解蛋白質，但在本工作中被用來作為連接酶，催化穩(wěn)定同位素編碼的精氨酸連接到胰蛋白酶酶解后的肽段的N末端。與一般的標記方法不同，在基于胰蛋白酶標記的反應形成了新的肽鍵，而且每個肽段只在N端標記上一個含同位素的氨基酸，由于新的肽鍵也能在串聯(lián)質譜中解離，所以新形成的其他碎片離子能大大提高的肽段的鑒定準確度。利用特異性N端標記的特性可以提取并形成豐富的b和y離子，在肽段的從頭測序方面也有良好的應用前景。這種酶促標記反應為蛋白質組學定量分析提供了一個全新的方法和技術平臺。
