近日，中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所研究員韓克利和研究員樸海龍，與深圳晶泰科技有限公司（XtalPi）團(tuán)隊(duì)合作，發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）熒光探針?lè)肿拥恼w識(shí)別性能除了受控于傳統(tǒng)意義上的識(shí)別基團(tuán)，還與熒光團(tuán)的缺電子性密切相關(guān)。
GST是一種重要的II期解毒酶，通過(guò)催化谷胱甘肽（GSH）親核進(jìn)攻并加合到目標(biāo)物的親電中心，增加其親水性以便于運(yùn)輸和排出細(xì)胞外，從而達(dá)到解毒的目的。相比于正常組織和細(xì)胞，GST在多種癌癥中的過(guò)表達(dá)，成為一種重要的多藥抗性癌癥標(biāo)記物。近紅外熒光探針因其高穿透性、低背景熒光、便于活體成像等優(yōu)點(diǎn)而更具實(shí)用價(jià)值，然而文獻(xiàn)中對(duì)檢測(cè)GST的該類(lèi)探針鮮有報(bào)道和研究。
大連化物所揭示熒光團(tuán)缺電子性在近紅外熒光探針識(shí)別機(jī)制中的作用
研究團(tuán)隊(duì)在前期工作（Research, 2020）的基礎(chǔ)上，在保持系列識(shí)別基團(tuán)不變的前提下，通過(guò)引入帶正電荷的近紅外菁類(lèi)熒光團(tuán)HCy以替換先前的雙光子熒光團(tuán)NI，發(fā)現(xiàn)HCy系列探針均比相應(yīng)的NI系列探針有顯著更強(qiáng)的非酶促和酶促反應(yīng)性。從實(shí)驗(yàn)和理論計(jì)算兩個(gè)層面對(duì)該研究及相關(guān)文獻(xiàn)中的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)結(jié)果進(jìn)行了詳實(shí)的分析推理論證后，研究人員得出結(jié)論：上述現(xiàn)象源于熒光團(tuán)更強(qiáng)的缺電子性而非親水性。由此導(dǎo)致HCy系列探針中兼具高靈敏度和低背景反應(yīng)噪音的實(shí)用探針為識(shí)別基團(tuán)親電性更弱的HCy2（對(duì)位取代基為三氟甲基）和HCy9（對(duì)位為氫原子），這與對(duì)位取代基為氰基的NI3形成了鮮明對(duì)比，也打破了其它文獻(xiàn)中人們對(duì)氰基的固有依賴(lài)。同時(shí)，在此現(xiàn)象的“信號(hào)放大”效應(yīng)下，識(shí)別基團(tuán)之間反應(yīng)性差異導(dǎo)致的其對(duì)不同亞型同工酶的選擇性區(qū)別得以顯現(xiàn)，該實(shí)驗(yàn)結(jié)論得到了分子對(duì)接模擬結(jié)果的印證。進(jìn)一步在細(xì)胞、組織及模式小鼠活體成像中的結(jié)果驗(yàn)證了HCy2和HCy9檢測(cè)GST的實(shí)用性。此外，盡管普遍認(rèn)為不易通過(guò)光致電子轉(zhuǎn)移（PET）調(diào)控近紅外探針的熒光傳感，該工作通過(guò)超快光譜和量化計(jì)算證明HCy系列探針的傳感機(jī)理確為PET，且識(shí)別基團(tuán)的親電性也會(huì)反過(guò)來(lái)影響熒光傳感效率。該研究為熒光探針的整體設(shè)計(jì)觀提供了啟示和借鑒。
上述研究成果發(fā)表在《化學(xué)科學(xué)》（Chemical Science）上。相關(guān)工作得到了國(guó)家自然科學(xué)基金和國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃等項(xiàng)目的資助。
